【LNP/AAV】藥物載體的生物物理表征方法

更新時間：2022-09-14 點擊次數：1721

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【LNP/AAV】脂質載體的生物物理表征方法

利用光散射和量熱技術對用于疫苗和治療的病毒和脂質載體進行生物物理表征

作者：Natalia Markova, Stefan Cairns, Hanna Jankevics-Jones, Michael Kaszuba, Fanny Caputo and Jérémie Parot

近期，馬爾文帕納科應用科學家和挪威SINTEF工業生物技術和納米醫學部的科學家們在Vaccines雜志上發表一篇名為《利用光散射和量熱技術對用于疫苗和治療的病毒和脂質體進行生物物理表征》的文章。

文章對多種用于新型疫苗研發制造的病毒或非病毒載體的表征方法做了專業的介紹。文中所述多種無標記生物物理技術作為互補的分析工具可廣泛用于AAV 和LNP的設計、表征和質量控制。且已經成功的用于表征AAV和LNP等藥物載體的物理、化學屬性，本文將對該項研究做簡要介紹。

原文：Vaccines 2022, 10, 49

引言

病毒載體和脂質納米顆粒（LNP）的結構復雜性影響其功能和藥物配方的成功性。這類分子被用作核酸（mRNA，DNA）的遞送平臺后，如何準確表征這些顆粒變得越來越重要。

在設計、產品開發和過程控制中，理化屬性的表征和質量控制需要選擇合適、互相補充的分析工具。選擇合適的技術來監測樣品需要考慮載體的性質、測量處于產品開發的哪個階段、以及測量的目的。可靠的測量結果和對數據的充分解析依賴深厚的方法學專業知識和全面的數據分析方法。

這里，我們將介紹如何通過綜合使用互相補充的、非標記生物物理技術，包括動態光散射（DLS）、多角度光散射（MADLS）、電泳光散射（ELS）、納米顆粒跟蹤分析（NTA）、多檢測器SEC和差示掃描量熱法（DSC），表征包裹mRNA的病毒載體和LNPs的理化屬性。

樣品

使用病毒和非病毒載體樣品，包括包裹mRNA的脂質納米顆粒（mRNA-LNPs），脂質體和腺相關病毒（AAV）。

測量內容與檢測技術

Zetasizer Ultra

Zetasizer Ultra 納米粒度及電位分析儀

Zetasizer Ultra 是快速而準確地測量顆粒和分子大小、顆粒電荷以及顆粒濃度的伴侶，其擁有用于高分辨率粒度測量切角度無關的多角度動態光散射（MADLS）技術可以更深入地展現樣品的顆粒分布，電泳光散射（ELS）技術可用于測量顆粒和分子的Zeta電位，以顯示樣品的穩定性和/或團聚傾向性。可以用于rAAV 顆粒的粒徑及衣殼滴度的表征。

NanoSight NS300

Nanosight NS300 納米顆粒跟蹤分析儀

采用納米粒子跟蹤分析 (NTA) 技術，馬爾文帕納科NanoSight 這種技術利用光散射和布朗運動的特性，獲得納米顆粒大小 0.01 - 1µm及顆粒濃度，以及實時表征蛋白質聚合(聚集)的解決方案。這使得 NTA成為病毒疫苗研究、納米毒物學和生物標志物檢測以及疾病狀態研究的細胞外囊泡、外泌體表征的重要技術。