【熱門(mén)應(yīng)用】乳清蛋白(WPI)在多檢測(cè)器SEC應(yīng)用表征

乳清是奶酪制作過(guò)程中的副產(chǎn)品，而乳清蛋白(WPI)是一種膳食補(bǔ)充劑和食品成分，是從牛奶中分離出來(lái)的。它含有很高比例的純蛋白質(zhì)，純度可達(dá)90%以上，幾乎不含乳糖、碳水化合物、脂肪和dan固醇。

乳清蛋白具有很高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，已成為各種保健食品中功能性成分的重要來(lái)源。它被廣泛用于嬰兒配方奶粉中，為最佳生長(zhǎng)發(fā)育提供天然的氨基酸來(lái)源，也經(jīng)常在食品工業(yè)中用作乳化劑和穩(wěn)定劑。WPI在運(yùn)動(dòng)員中也很受歡迎，因?yàn)樗軌虮环浅Ｑ杆俚叵椭憻捄蟮纳眢w從分解代謝狀態(tài)恢復(fù)到合成代謝狀態(tài)。據(jù)有些應(yīng)用表明，WPI可能具有抗炎或抗癌的作用。

乳清蛋白由以下四種主要成分組成：

在本文，使用OMNISEC多檢測(cè)器系統(tǒng)對(duì)WPI乳清蛋白樣品進(jìn)行表征。對(duì)混合物中的4種主要成分進(jìn)行了分離，并分別進(jìn)行測(cè)定。

使用馬爾文帕納科的OMNISEC多檢測(cè)器系統(tǒng)對(duì)乳清蛋白樣品進(jìn)行分析，使用示差檢測(cè)器(RI)、紫外檢測(cè)器(PDA)、7°角光散射+90°角光散射(LALS/RALS)和粘度(IV)檢測(cè)器。樣品用馬爾文P柱(300×7.8 mm ID)分離，1×P4000和1×P3000柱分離。

流動(dòng)相為0.1M pH7.0磷酸鹽緩沖液，每次進(jìn)樣總物質(zhì)約500μg。用OMNISEC軟件中的共聚分析計(jì)算對(duì)色譜圖進(jìn)行分析。所有蛋白的dn/dc是0.185。

色譜峰3的分子量為33 kDa，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為75%，與β-乳球蛋白相對(duì)應(yīng)，清楚地表明它是乳清蛋白中的主要成分。β-乳球蛋白單體的分子量為18.4kDa，但它在活性狀態(tài)下以二聚體的形式存在，因此，盡管略有差異，但33 kDa的峰仍然表明是二聚體。

α-乳蛋白(色譜峰4)的分子量為15 kDa，與理論值相符。一個(gè)有趣的發(fā)現(xiàn)是，α-乳蛋白的RI峰(測(cè)量濃度)的峰高不到β-乳球蛋白的一半，而兩者的紫外信號(hào)高度非常相似。這表明α-乳蛋白在280nm處的消光系數(shù)高于β-乳球蛋白。

根據(jù)分子量將70K峰和150K峰分別認(rèn)定為血清白蛋白和免疫球蛋白。所有四個(gè)峰的Pd值都很小，這與預(yù)期一致，這是因?yàn)榈鞍踪|(zhì)總是有一個(gè)窄的Pd值。

從分離機(jī)理來(lái)看，流體力學(xué)半徑值隨保留體積的增加而減小，證實(shí)了低分子量蛋白質(zhì)的尺寸較小。特性粘度值也隨著分子量的增加而降低，但不是線性的，反映了蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的不同。β-乳球蛋白二聚體的特性粘度最清楚地說(shuō)明了這一點(diǎn)，盡管其分子量是α-乳球蛋白單體的兩倍，但僅比其值高出15%。這表明二聚體β-乳球蛋白的結(jié)構(gòu)比α-乳蛋白更致密。

聚集體

在10-12mL的低保留體積下，LALS和RALS檢測(cè)器均出現(xiàn)單峰，而RI和UV檢測(cè)器則*沒(méi)有峰。RI和UV信號(hào)與濃度成正比，因此該峰的濃度一定很低。

從瑞利散射方程得知，光散射強(qiáng)度與分子量乘以濃度成正比，因此分子量必須非常大才能在光散射圖中顯示色譜峰信號(hào)。該聚集體以較低的保留體積洗脫出來(lái)，粘度檢測(cè)器中也沒(méi)有峰。這表明這些聚集體非常致密，具有較低的特性粘度，而不是纖維狀或其他結(jié)構(gòu)，因此粘度檢測(cè)器沒(méi)有檢測(cè)到色譜峰信號(hào)。