【知識庫】淺談幾種非標記分子間相互作用技術的差異

本文摘要

研究分子間相互作用，可以揭示很多生理和病理的相關問題，對于生命科學領域來說至關重要。本文簡明扼要地對比了三種分子互作動力學分析技術，為科研人員選擇適用的表征技術提供了可靠依據。

01丨生命科學研究中

      使用的那些分子相互作用技術

了解分子之間的相互作用——尤其是親和力與動力學——可以回答許多重要的關于生理和病理相關的問題，因此，分子相互作用分析在許多研究領域被視為熱點之一也就不足為奇了。

例如，你可能需要知道一個分子是如何與受體相互作用的，以了解信號轉導是如何在生物體中發生的?；蛘咴谒幬锇l現中，你可能想了解一種小分子藥物或者片段藥物是否與感興趣的潛在藥靶相結合，以及它們之間結合的緊密程度。結合親和力可以告訴我們這一點，但我們還可以從結合動力學的測量中獲得更多細節。

用于研究結合動力學的技術非常多樣，且具有多種不同的原理。在這里，我們僅比較三種。倘若你想了解有關測量分子互作中的熱力學等信息，請參閱我們的等溫滴定量熱技術（Isothermal Titration Calorimetry, ITC）頁面。

傳統ELISA技術與非標記光柵耦合干涉技術的原理對比

技術1：

什么是生物膜層干涉技術？

（Bio-Layer Interferometry, BLI）

生物膜層干涉技術（BLI）是一種基于表面的、無標記的光學技術。與其他生物傳感器技術不同，BLI不使用復雜的微流控結構，而是通過將光纖傳感器tip頭浸入樣品/緩沖液中來進行檢測。在檢測過程中，從光纖傳感器tip頭表面界面的反射光依賴于tip頭表面附近由于互作過程造成的厚度變化。該表面的反射光與內部參考表面反射的光會發生干涉，從而形成干涉圖案。

當待測分子與浸泡在實驗溶液（如樣品）中的生物膜層表面結合時，膜層厚度和光譜干涉模式發生變化。通過實時記錄光譜干涉圖案的改變，該技術可以實時跟蹤傳感器表面附近分子結合與解離信息。

BLI技術

優點

? 使用簡便、易于上手；

? 無堵塞風險，適用于復雜和粘度較大的樣品；

? 耗材可根據需要獨立使用，降低單次實驗成本；

? 使用參考傳感器可減少Bulk Effect

BLI技術

缺點

? 傳感器的靈敏度比SPR和GCI傳感器低幾個數量級；

? 確定動力學參數時的精度有限，噪音較高；

?  測量緊密結合分子對和快速結合速率的能力有限；

?  非層流模式檢測，在擴散受限條件下進行測量；

? 測量快速解離速率的能力有限

技術2：

什么是表面等離子體共振？

 (Surface Plasmon Resonance, SPR)

表面等離子體共振（SPR）是另一種基于光學的無標記分析方法——事實上，它是最 早的基于表面的無標記技術之一。SPR檢測的是傳感器表面附近的消逝波場內的分子相互作用引起的折射率變化。

在這類傳感器中，玻璃支架上的金屬薄膜（通常為50 nm金膜）被特定波長的入射光照射。在特定的角度下，依賴于表面附件的折光率，激發所謂的表面等離子體。由于在反射光中損失了這部分能量，因此，反射光在檢測器上時會形成光強度的“下降"（暗影）（SPR Dip角）。

通過實時確定SPR Dip角的位置，SPR可以測量金膜表面附近（~ 250 nm以內）折射率的變化。儀器通常使用精密的微流路結構引入含有分析物的溶液來進行檢測，并且至少需要一個參考流動池用于消除Bulk Effect。

SPR技術

優點

? 靈敏度高

? 層流模式，參考流動池消除Bulk Effect

? 可以測量緊密的分子和快速的結合速率

SPR技術

缺點

? 由于使用串聯的流動池，對具有快速解離性質的分子互作檢測有限

? 傳統的微流控設計易于堵塞，后期需要較高維護成本

? 測量快速解離速率的能力有限

技術3：

什么是光柵耦合干涉技術？

(Grating-Coupled Interferometry, GCI)

基于波導干涉的技術——另一種無光學標簽的方法——光柵耦合干涉技術（GCI）可以實時監測和表征分子相互作用，確定與固定配體相互作用的動力學速率參數、親和力和分析物分子的活性濃度。

在波導干涉測量中，折射率的變化是在傳感器表面附近波導的消逝場內測量的。這些折射率的變化會導致波導結構中光的相位（相位調制）發生變化。光在整個波導結構中傳播，具有較長的作用距離（可達 3 mm），產生跨越傳感器表面整體的倏逝波。相位變化信息以干涉圖案方式輸出。總部位于瑞士的Creoptix的GCI技術利用了波導干涉測量的優勢，并消除了傳統波導干涉儀器的校準問題。

GCI技術

優點

? 折光率檢測作用面大，原始層面信號的靈敏度高

? 無堵塞的微流控-芯片一體化設計，保留層流模式

? 可測量緊密的結合分子和快速的解離速率

? 可實現單一濃度完成動力學測定，無需配制濃度梯度

02丨BLI，SPR與GCI：哪種分子相互作用技術最 好？

最 佳的分子相互作用技術取決于分子和應用類型以及用戶的需求。下面，您可以看到這三種技術在四個關鍵需求方面的比較：應用范圍的廣泛性、弱結合分子的測量、ji強結合分子的測量和低成本的系統維護。

結論

Conclusion

綜上所述，全新的非標記分子互作技術：光柵耦合干涉（GCI）技術，在應用領域、檢測強弱結合的能力的方面均有非常優異的表現，其zhuan利的微流路設計，更減少宕機時間，降低了維護的成本，是生命科學領域研究分子間相互作用的全新利器。